固相萃取小柱是從層析柱發(fā)展而來(lái)的一種用于萃取、分離、濃縮的樣品前處理裝置。主要應(yīng)用于各種食品、農(nóng)畜產(chǎn)品、環(huán)境樣品以及生物樣品中目標(biāo)化合物的樣品前處理。固相萃取技術(shù)已經(jīng)被廣泛地使用在許多國(guó)標(biāo)（GB/T）以及行業(yè)分析標(biāo)準(zhǔn)中。下面我們就一起來(lái)了解一下它的工作原理！

 

　　固相萃取小柱原理如下：

　　1、選擇固相萃取小柱或?yàn)V膜首先應(yīng)根據(jù)待測(cè)物的理化性質(zhì)和樣品基質(zhì)，選擇對(duì)待測(cè)物有較強(qiáng)保留能力的固定相。若待測(cè)物帶負(fù)電荷，可用陰離子交換填料，反之則用陽(yáng)離子交換填料。若為中性待測(cè)物，可用反相填料萃取。小柱或?yàn)V膜的大小與規(guī)格應(yīng)視樣品中待測(cè)物的濃度大小而定。對(duì)于濃度較低的體內(nèi)樣品，一般應(yīng)選用盡量少的固定相填料萃取較大體積的樣品。

 

　　2、活化：萃取前先用充滿小柱的溶劑沖洗小柱或用5～10ml溶劑沖洗濾膜。一般可先用甲醇等水

　　溶性有機(jī)溶劑沖洗填料，因?yàn)榧状寄軡?rùn)濕吸附劑表面，并滲透到非極性的硅膠鍵合相中，使硅膠更容易

　　被水潤(rùn)濕，之后再加入水或緩沖液沖洗。加樣前，應(yīng)使SPE 填料保持濕潤(rùn)，如果填料干燥會(huì)降低樣品保固相萃取技術(shù)方法固相萃取技術(shù)方法留值；而各小柱的干燥程度不一，則會(huì)影響回收率的重現(xiàn)性。

 

　　3、上樣：一般可采取以下措施：

　　①用0.1mol/L酸或堿調(diào)節(jié)，使pH<3或pH>9，離心取上層液萃取；

　　②用甲醇、乙腈等沉淀蛋白質(zhì)后取上清液，以水或緩沖液稀釋后萃取；

　　③用酸或無(wú)機(jī)鹽沉淀蛋白質(zhì)后取上清液，調(diào)節(jié)pH 值后萃取；

　　④超聲15min后加入水、緩沖液，取上清液萃取。尿液樣品中的藥物濃度較高，加樣前先用水或緩沖液稀釋，必要時(shí)可用酸、堿水解反應(yīng)破壞藥物與蛋白質(zhì)的結(jié)合，然后萃取。流速應(yīng)控制為1ml/min，流速快不利于待測(cè)物與固定相結(jié)合。

 

　　4、淋洗：反相SPE的清洗溶劑多為水或緩沖液，可在清洗液中加入少量有機(jī)溶劑、無(wú)機(jī)鹽或調(diào)節(jié)pH值。加入小柱的清洗液應(yīng)不超過(guò)一個(gè)小柱的容積，而SPE濾膜為5～10ml。

 

　　5、洗脫待測(cè)物：應(yīng)選用5～10ml離子強(qiáng)度較弱但能洗下待測(cè)物的洗脫溶劑。若需較高靈敏度，則可先將洗脫液揮干后，再用流動(dòng)相重組殘留物后進(jìn)樣。體內(nèi)樣品洗脫后多含有水，可選用冷凍干燥法。保留能力較弱的SPE填料可用小體積、較弱的洗脫液洗下待測(cè)物，再用極性較強(qiáng)的HPLC分析柱如C18柱分析洗脫物。若待測(cè)物可電離，可調(diào)節(jié)pH值，抑制樣品離子化，以增強(qiáng)待測(cè)物在反相SPE填料中的保留，洗脫時(shí)調(diào)節(jié)pH值使其離子化并用較弱的溶劑洗脫，收集洗脫液后再調(diào)節(jié)pH值使其在HPLC分析中達(dá)到*分離效果。在洗脫過(guò)程中應(yīng)減慢流速，用兩次小體積洗脫代替一次大體積洗脫，回收率更高。